RESPIRATORY BURST

Respiratory burst (RB) merupakan salah satu bentuk respons imun selular yang diaktivasi oleh sel yang melakukan fagositosis dan menghasilkan Reactive Oxygen Intermediate (ROI)/radikal oksigen sebagai produk akhir (Rodriguez dan Le Moullac 2002).

Langkah-langkah menguji RB pada udang (Song dan Hsieh 1994):

Fungsi masing-masing bahan uji:

Bahan	Peran	Sumber
Nitroblue tetrazolium (NBT)	-     Digunakan sebagai substrat yang dapat mengaktifkan sel hemosit untuk membentuk ROI -   NBT tersebut akan direduksi oleh sel hemosit sehingga terjadi ledakan oksidatif yang ditandai dengan terbentuknya endapan formazan (Sebelumnya warna pelet yang ditambahkan NBT adalah kuning)	(Koening et al. 2017; Molehin et al. 2021)
Potassium hydroxide (KOH) dan Dimethyl sulphoxide (DMSO)	-      KOH dikenal sebagai penstabil pH -  DMSO dikenal sebagai pelarut untuk mengangkut molekul -  Tujuan penambahan KOH dan DMSO bertujuan untuk melihat reaksi aktivitas RB dimana setelah penambahan NBT akan membentuk kristal formazan, untuk membaca ROI yang dihasilkan perlu bantuan KOH dan DMSO yang menghasilkan warna biru tua/ungu. Tujuan perubahan warna untuk memudahkan pembacaan di microplate reader	(Hampton et al. 2020)
Metanol Absolut (Metanol 100%)	-        Menghentikan reaksi NBT dan sel hemosit agar tidak terus membentuk ROI dan kristal formazan	(Rudyatmi 2011)

 

Maksud dari 0,3% NBT kedalam HBSS:

-          Pemberian HBSS 0,3% = 0,3% x 3 mL (HBSS) = 0,009 gram/9 mg Serbuk NBT

DAFTAR PUSTAKA

Hampton LMT, Jeffries MKS, Venables BJ. 2020. A practical guide for assessing respiratory burst and phagocytic cell activity in the fathead minnow, an emerging model for immunotoxicity. MethodsX. 7:1-15. doi:10.1016/j.mex.2020.100992.

Rodriguez J, Le Moullac G. 2000. State of the art of immunological tools and health control of penaeid shrimp. Aquaculture. 191(1):109–119. doi:https://doi.org/10.1016/S0044-8486(00)00421-X.

Song YL, Hsieh YT. 1994. Immunostimulation of tiger shrimp (Penaeus monodon) hemocytes for generation of microbicidal substances: analysis of reactive oxygen species. Developmental and Comparative Immunology. 18(3):201–209. doi:10.1016/0145-305X(94)90012-4.